首页 > 产品系列 > RNA相关 > 傻瓜RT反应体系(Easy-GoTMRT PreMix)
产品系列

简 介:
傻瓜逆转录反应体系在单个反应管中包含有预先混和好的合成 cDNA 所需的试剂,为您提供更为简便的cDNA合成方法。

优势与特色:
时效性:显著缩短建立反应所需的时间。
稳定性:傻瓜逆转录反应体系包含有逆转录酶稳定剂,所以逆转录酶的活力和稳定性是极其有保障的。若贮存在-20℃有效期2年以上,室温贮存超过一个月,95℃为20分钟,预变性对酶活性无影响。
准确性:在大批量反应中,傻瓜逆转录反应体系在数千次反应体系中都能得到一致的结果,严格的功能质量检测显示出高度的一致性,与标准反应相比产物量更高。
简易性:极少的操作步骤大大降低了出错率,每管中加有指示染料以便于琼脂糖凝胶电泳,省却了样品与上样缓冲液混合等步骤。

实验方法:
1.根据下表将适当浓度的模板RNA和引物混合在DEPC处理过的管中模板RNA和引物在反应体系中的用量

反应体系

20µl反应体系 50µl反应体系

模板RNA

总RNA 0.5~1.0µg 1.0~2.0µg
Poly(A)RNA 0.05~0.1µg 0.1~0.2µg

引物

特异引物 10~30pmol 20~50pmol
Oligo(dT)18 0.5µg 1.0µg
随机引物 0.05~0.25µg 0.1~0.5µg

2. 将其70℃温育5分钟后放置冰上。
3. 将其加入到傻瓜RT-PreMix反应管中,并用DEPC处理水补足到相应的反应液体积。
4. 通过振荡将冻干物完全溶解,然后短暂离心。
5. 加少许矿物油(若使用带加热盖的PCR仪,可省略此步骤)。
6. 根据下列推荐的条件进行cDNA合成
42℃ 60分钟(cDNA合成)
94℃ 5分钟(反转录酶失活)

逆转录完成后接着进行PCR扩增,可用傻瓜PCR反应体系继续进行PCR操作:
1. 转移1~3 µl 合成的cDNA至傻瓜PCR反应体系中;
2. 应用傻瓜PCR反应程序进行PCR扩增(退火温度及时间需要针对不同的引物/模板组合加以优化)。


目录号 品名及规格 价格
FRT-2.5 RT PreMix,25管,0.5ml薄壁管,20μl体系 360元
FRT-2.2 RT PreMix,25管,0.2ml薄壁管,20μl体系 360元