简 介:
傻瓜逆转录反应体系在单个反应管中包含有预先混和好的合成 cDNA 所需的试剂，为您提供更为简便的cDNA合成方法。

优势与特色:
时效性：显著缩短建立反应所需的时间。
稳定性：傻瓜逆转录反应体系包含有逆转录酶稳定剂，所以逆转录酶的活力和稳定性是极其有保障的。若贮存在-20℃有效期2年以上，室温贮存超过一个月，95℃为20分钟，预变性对酶活性无影响。
准确性：在大批量反应中，傻瓜逆转录反应体系在数千次反应体系中都能得到一致的结果，严格的功能质量检测显示出高度的一致性，与标准反应相比产物量更高。
简易性：极少的操作步骤大大降低了出错率，每管中加有指示染料以便于琼脂糖凝胶电泳，省却了样品与上样缓冲液混合等步骤。

实验方法:
1.根据下表将适当浓度的模板RNA和引物混合在DEPC处理过的管中模板RNA和引物在反应体系中的用量

2. 将其70℃温育5分钟后放置冰上。
3. 将其加入到傻瓜RT-PreMix反应管中，并用DEPC处理水补足到相应的反应液体积。
4. 通过振荡将冻干物完全溶解，然后短暂离心。
5. 加少许矿物油（若使用带加热盖的PCR仪，可省略此步骤）。
6. 根据下列推荐的条件进行cDNA合成
42℃ 60分钟（cDNA合成）
94℃ 5分钟（反转录酶失活）

逆转录完成后接着进行PCR扩增，可用傻瓜PCR反应体系继续进行PCR操作：
1. 转移1～3 µl 合成的cDNA至傻瓜PCR反应体系中；
2. 应用傻瓜PCR反应程序进行PCR扩增（退火温度及时间需要针对不同的引物/模板组合加以优化）。