赛百盛公司研制的“一管一反应”傻瓜PCR反应体系是预先混合好的PCR反应优化系统，在单个反应管（0.2ml或0.5ml）中提供了精确的PCR扩增所需的全部试剂（包括Taq DNA聚合酶、缓冲液、 dNTPs、上样染料），以冻干状态稳定存在，能长期保存。使用时只需加入DNA模板、引物和水即可，扩增完毕可直接上样电泳，无需再加染料。该系统具有稳定、高效、简便、防污染等特点。

优势与特色:

可靠性：每管傻瓜PCR反应体系都包含了聚合 酶稳定剂（专利产品），所以DNA聚合酶的稳定性 能得到充分保证，-20℃可贮存1年，常温下超过15 天，预变性对酶活性无影响。

高效性：由于选用高质量的TaqDNA聚合酶， DNA聚合时的延伸速度及扩增片段的长度都超过了 同类产品。几乎可用于所有类型的PCR反应。

防污染：在常规PCR实验中，由于反复冻融和 抽取，可能导致试剂的浪费和交叉污染，增加出错 的机率，使用本系统则无此类问题发生。

重复性：严格的质量监控试验，可保证其具有 高度稳定的可重复性。

简易性：每管中预先加入了指示染料及沉淀剂，在琼脂糖凝胶电泳时省却了样品与上样缓冲液混合的步骤

概述:
在0.2ml或0.5ml薄壁反应管中已加入PCR反 应所需的全部试剂（DNA模板、引物和水除外），因 此使用非常方便，减少了建立PCR反应体系所需的 时间，并最大限度地降低了取样时出错的可能性及 交叉污染的风险。由于预先在反应体系中加入了上 样染料，扩增后可直接电泳；由于加入了特殊的稳 定剂，在-20℃下的稳定期为一年，常温下的稳定期 为15天，预变性对于DNA聚合酶的活性没有任何 影响。 该反应体系中DNA聚合时的最佳延伸温度为 70~75℃。上样染料的泳动速度介于溴酚蓝和二甲 苯青之间，相当于400~500bp。

在PCR反应管中包含如下成份并已冷冻干燥：

用户自备的仪器及试剂：
1. 基因扩增仪
2. 台式离心机
3. 电泳仪及电泳槽
4. 紫外透照仪
5. 0.2ml或0.5ml离心管架
6. 10μl、20μl或100μl移液器及吸头
7. 琼脂糖
8. TAE缓冲液
9. 超纯水

操作方法：
(一)加样
由于傻瓜PCR反应管中的各种成份已冻干，其体积可忽略不计。

1. 反应体系为20μl时，在傻瓜PCR反应管中加入
下列成份：
DNA模板5~50ng
上游引物10~20pmol
下游引物10~20pmol
补超纯水至20μl，振荡混匀并短暂离心。若基
因扩增仪不防蒸发，请加1~2滴石蜡油。

2.当反应体系为 50μl时，在傻瓜 PCR反应管中加
入下列成份：
DNA模板 10~100ng
上游引物 20~50pmol
下游引物 20~50pmol
补超纯水至 50μl，振荡混匀并短暂离心。若基因扩增仪不防蒸发，请加1~2滴石蜡油。

(二)扩增
在基因扩增仪上94℃预变性2.5min，然后进入以下30个循环：94℃变性45sec，50℃~65℃退火 1min，72℃延伸1.5min。循环完毕，72℃延伸5min。扩增条件可根据具体情况作适当调整，以上条件仅供参考。

(三)电泳
取5μl反应液，于0.8%琼脂糖凝胶中120V电泳10~15min，在紫外灯下观察结果。