Pfu DNA聚合酶│上海赛百盛基因技术有限公司

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产品系列

概述:
耐热性DNA聚合酶，分子量90KD，催化5'→3'DNA合成，DNA聚合时的延伸速度为600bp/min，最佳温度65~75℃，dNTPs的工作浓度为100-300μM，最佳Mg2+浓度为2~3mM，最佳pH为8.1~ 9.1，其PCR产物为平整末端，无3'端的单个dA。 Pfu DNA聚合酶具有独特的3'→5'外切核酸酶活性，能修正错配碱基，从而保证DNA扩增的高保真度。无5'→3'外切核酸酶活性。尤其适用于长度3kb以下DNA的高保真扩增，使用方法同Taq DNA聚合酶，DNA扩增（PCR）时，20μl反应体系需1~1. 5unit，50μl反应体系需2~3units。

目录号	规格	价格
EP-500	500U	200元

包装及组成：：

	500单位
1. Pfu DNA聚合酶（5U/μl）	100μl
2. 10 × Pfu缓冲液	1.5ml
3. PCR染料	1.5ml

Pfu DNA聚合酶储存液：
50mM Tris-HCl(pH8.2) ； 0.1mM EDTA；0.1% Tween 20；0.1% NP-40；1mM DTT；50%glycerol缓冲液。-20℃保存一年以上，避免反复冻融。

10×Pfu反应缓冲液：
100mM KCl，160mM (NH4)2SO4，20mM MgSO4，200mM Tris-HCl（pH8.8），1%TritonX-100，BSA (fraction V) 1mg/ml。

使用方法：
我们推荐您使用本公司免费赠送的PCR染料，一是使扩增反应更趋优化；二是扩增完毕无需再加上样染料，可直接上样电泳。建议在0.2ml或0.5ml PCR反应管中加入下列成份：

常见问题解答:

1. 使用Pfu可以扩增多长的片段？
对于简单的模板，Pfu应该可以很好的扩增3kb 以下的片段。扩增更长片段时，能否成功扩增主要与模板和引物的设计有关。

2. 使用Pfu进行PCR扩增后的PCR产物能否进行TA 克隆？
不能直接进行T-A克隆。首先要将PCR产物进行纯化，然后在dATP存在条件下，用Taq酶72℃ 处理15分钟进行3'末端加A处理，再与T-A载体连接。

3. 用同单位的Pfu和Taq扩增，为什么Pfu扩增效率比Taq酶低？
因为高保真性能的Pfu聚合酶具有3'→5'核酸外切酶的活性，扩增过程中如果产生了错配的碱基，它可以将其切掉，从而保证了扩增的准确性。正是由于此酶具有核酸外切酶的功能，往往扩增效率比Taq要低，而且还容易降解引物，因而在设置PCR反应时，最好最后加入Pfu酶。

四种耐热DNA聚合酶比较:

特点及应用
Taq DNA Polymerase	延伸速度最快的耐热DNA聚合酶，理想状态下为2~4kb/min。可以很好的扩增10kb以下的DNA片段。用于普通PCR扩增，其PCR产物含3'端单个dA，能进行TA克隆。
Taq-Red TM DNA Polymerase	除具有普通Taq DNA Polymerase的特点外，该酶呈红色，加取样易于观察，使用更方便；PCR完成后可直接电泳，无需再加上样染料。用于普通PCR扩增，其PCR产物含3'端单个dA，能进行TA克隆。
Pfu DNA Polymerase	DNA聚合时的延伸速度为600bp/min，该酶具有独特的3'→5' 外切核酸酶活性，能修正错配碱基，从而保证DNA扩增的高保真度。适用于高保真扩增长度为3kb以下的片段。保真度要求较高，片段比较短，如点突变、基因筛选等。
V-Taq DNA Polymerase	V-Taq DNA聚合酶混合物中含有持续合成能力的Taq DNA聚合酶和具有校对活性的Pfu DNA聚合酶。V-Taq DNA聚合酶尤其适合复杂的长片段的扩增，它能扩增长至10kb的动植物基因组DNA和20kb 的λDNA。可用于普通PCR、长片段PCR及复杂模板的PCR扩增；TA克隆和平末端克隆；高保真长片段扩增，如构建基因图谱及分子遗传学研究等。