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产品系列

概述
Taq DNA聚合酶是最常用的PCR酶,以Lambda DNA为模板可以很好地扩增6kb的DNA片段,以人基因组DNA为模板可以很好地扩增2kb的DNA片段,但很难扩增更长的DNA片段。为了克服Taq DNA聚合酶的这种缺陷,许多公司采用了各种各样的PCR系统,系统中包含Taq DNA聚合酶和有校对活性的耐热DNA聚合酶。而V-Taq DNA聚合酶尤其适合复杂的长片段的扩增,它能扩增长至10kb 的动植物基因组DNA和20kb的Lambda DNA。与Taq DNA聚合酶相比,V-Taq的另一个优点是酶活力更高,扩增效率明显高于Taq酶。因此,V-Taq DNA聚合酶混合物是一种适用性更为广泛的酶,它能以各种DNA为模板,能扩增短片段的DNA也能扩增长片段的DNA,能扩增简单的DNA也能扩增复杂的DNA。

贮存:-20℃可稳定保存1年以上。

特性: 
1. 较强的PCR扩增的保真性:V-Taq DNA聚合酶混合物中含有持续合成能力的Taq DNA聚合酶和具有校对活性的Pfu DNA聚合酶。
2. 提高了PCR扩增的产量:V-Taq DNA聚合酶混合物的精确调配增强了目的产物的扩增效果。
3. 更容易实现长片段PCR扩增:为扩增长片段的 PCR产物,V-Taq DNA聚合酶混合物和反应缓冲液均已最优化。

目录号 规格 价格
EVT-500 500U 180元

适用范围
标准PCR和长片段PCR
复杂模板的PCR
TA克隆和平末端克隆

试剂盒包装
V-Taq DNA聚合酶 (5U/μl) 500units
10×PCR buffer (20mM Mg2+) 1.5ml

10×PCR Buffer:
300mM Tris-HCl(pH9.0)
300mM盐(包括K+和NH4+)
20mM Mg2+

PCR反应体系(以20μl体系为例)

DNA模板 1pg-1μg
上游引物 5-10pmoles
下游引物 5-10pmoles
V-Taq DNA聚合酶(5U/μl) 0.25-0.5μl
10 × PCR buffer 2μl
dNTPs(2.5mM each) 2μl
无菌蒸馏水 至20μl

扩增短片段和长片段的循环条件:
<10kb的循环条件

温度 时间 循环数
预变性 92-94℃ 2-4 min 1
变性 退火 延伸 94℃ 45-65℃ 72℃ 15s-1min 15s-1min 1min/1-1.5kb 25-30
最后延伸 保存 72℃ 5-10min 1
4℃
[注] :<1kb的片段延伸30s-1 min已足够

>10kb的循环条件

温度 时间 循环数
预变性 92-94℃ 2-4 min 1
变性 退火 延伸 94℃ 45-65℃ 72℃ 15s-1min 15s-1min 1min/1-1.5kb 10
变性 退火 延伸 94℃ 45-65℃ 72℃ 15s-1min 15s-1min 1min/1-1.5kb+20s/cycle 15-20
最后延伸 保存 72℃ 4℃ 5-10min 1

PCR条件的优化
为扩增特异的目的DNA片段,必须在适当的 范围内调整各个反应组份的浓度(时间、温度等参 数),以实现对特定片段的高效扩增。

模板DNA
为扩增长片段目的片段,必须使用高质量的、完整的、高纯度的模板DNA。

引物: 
PCR反应的引物是寡核苷酸,一般长度为15-30个碱基,它们与相应的DNA链杂交后引导底物与其侧面的目的DNA片段杂交。建议引物的G+C含量为40%-60%。

常见问题及参考意见

常见问题 可能原因 参考意见
产物很少或
没有产物

引物

模板DNA存在问题

退火温度不合适

退火时间不合适

延伸时间太短

必要时采用热启动

-引物已降解或者引物浓度不够,需要优化引物浓度

-检查模板DNA的浓度、贮存条件及质量

-将退火温度2℃间隔递减

-退火时间应为30-60s

-将延伸时间延长1min

-采用手工热启动PCR或用热启动PCR酶

PCR产物有
多条带或条
带涂抹

退火温度太低

采用热启动

引物设计不合理

起始模板浓度太高

-将退火温度2℃间隔递增